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細胞養不好?無(wú)水氯化銅廠(chǎng)家的這些技巧請收好
在無(wú)水氯化銅廠(chǎng)家的實(shí)驗中,細胞是所有實(shí)驗的基礎。在腫瘤細胞培養的過(guò)程中,總是會(huì )有這樣的麻煩。在下列情況下,你如何解決它?
如何判斷細胞污染?
1:細胞培養液變渾濁,常見(jiàn)是湯黃色液體,一般認為是細菌污染。
2:含有黑色斑點(diǎn)的細胞培養基,通常被認為是黑蟲(chóng)。
狀態(tài)3:細胞培養基清晰,但在培養液中可以看到帶有毛發(fā)的銀耳狀物質(zhì),可能是真菌感染。
對策:直接將細胞污染拋出來(lái),用酒精和棉球將孵化器消滅,用紫外線(xiàn)照射半小時(shí),防止再次污染。同時(shí),在細胞培養中,青霉素(特別是初學(xué)者)加入到培養基中。
在細胞培養的過(guò)程中,細胞周?chē)募毎車(chē)性S多小黑點(diǎn)。你怎么做的?
策略1:胰蛋白酶消化后很短時(shí)間,低速離心,不同的實(shí)驗室不一樣,如果你是1000到5分鐘,它可以改為700~3分鐘,培養的細胞用新培養瓶,細胞收集是少一點(diǎn),但一般可以清洗很多。過(guò)幾代要好得多。
策略2:如果多次嘗試后不干凈,是否有支原體污染值得懷疑,OK用于預防支原體感染。一般3~5天細胞干凈。
在細胞培養過(guò)程中,貼壁細胞表面出現了許多死亡細胞。他們在文章中是如何被打破的?
有一次測試,之后又用PBS洗兩次,加胰蛋白酶在搖,然后PBS將很快被倒出,洗凈,加胰酶消化正常。死細胞由于粘附能力弱,胰蛋白酶的次加入會(huì )下降,胰蛋白酶的第二個(gè)細胞是更活躍的細胞。整個(gè)時(shí)間后,子代的方法是一樣的。2~3次后,細胞狀況良好。
細胞胞質(zhì)疏松,狀態(tài)不好,不能提高,怎么辦?
策略1:在正常情況下,有必要將血清從血清轉為血清或增加血清濃度,將血清濃度提高到15%~20%,培養48 h,然后改變?yōu)檎5?0%濃度。
策略2:血清開(kāi)始后還可采取提高細胞密度的方法,從培養瓶到板12孔板、細胞密度、細胞因子分泌、腫瘤細胞通過(guò)旁分泌途徑促進(jìn)細胞生長(cháng)。
預防策略:胞漿疏松,老化是由于細胞數量較多,胰蛋白酶消化時(shí)間過(guò)長(cháng),此時(shí)必須控制細胞數,注意胰蛋白酶消化時(shí)間過(guò)長(cháng),胰蛋白酶消化時(shí)間過(guò)長(cháng),易導致?tīng)顟B(tài)不佳和胞漿疏松。有一個(gè)竅門(mén),袁元從沒(méi)試過(guò),你可以試著(zhù)把細胞凍在時(shí)間里,恢復,細胞會(huì )長(cháng)得更好。
這些細胞是如何在文化中長(cháng)期存在的?
許多人會(huì )遇到如何處理從其他地方購買(mǎi)細胞或通過(guò)快遞來(lái)表達細胞的問(wèn)題,以及用培養瓶填充細胞的問(wèn)題。
步是將37℃的培養箱放置4小時(shí),這樣細胞可以在長(cháng)途跋涉后穩定下來(lái)并觀(guān)察細胞狀態(tài)。
第二步:將新鮮培養基和舊培養基稀釋1:1的細胞,如果條件不好,血清濃度為15%,否則正常訓練,所以有一個(gè)過(guò)渡期,而不是細胞處于血清狀態(tài)差后,48小時(shí)后變?yōu)檎Q迮囵B濃度15%。